May 30, 2016 - Все эти условия (введение генов в клетки, их репликация, транскрипция и трансляция) обеспечиваются с помощью векторных ДНК (векторов). Векторами называют небольшие автономно реплицирующиеся молекулы ДНК, в частности плазмиды, ДНК фагов или других вирусов, либо их.
Тема работы: Требования к векторной молекуле. Экзоны и интроны в геномах эукариот. Плотность генов в геноме человека Предметная область: «Другие работы по: Краткое содержание: Содержание 9. Требования к векторной молекуле 3 12. Геномные библиотеки (банки генов). Производство и использование тест-препаратов в гибридомной технологии 7 48. Экзоны и интроны в геномах эукариот 8 52.
Плотность генов в геноме человека 11 60. Выпишите и дайте объяснение терминам, встретившимся Вам при выполнении контрольной работы.
Векторный Генератор Сигналов Smbv100a
14 Список литературы 17 9. Требования к векторной молекуле Вектор - молекула ДНК или РНК, состоящая из двух компонентов: векторной части (носителя) и клонируемого чужеродного гена. Задача вектора – донести выбранную ДНК в клетку-рецепиент, встроить ее в геном, позволить идентификацию трансформированных клеток, обеспечить стабильную экспрессию введенного гена. Таким образом, вектор должен быть небольшим, способным поддерживаться в клетке-хозяине (реплицироваться), многократно копироваться (ампфлицироваться), экспрессировать соответствующий ген (содержать соответствующие регуляторные последовательности), должен иметь маркерный ген, позволяющий различать гибридные клетки для эффективной селекции их; должен быть способен передаваться в клетку соответствующего организма 3, c.143. Векторами называют молекулы-переносчики фрагментов нуклеиновых кислот. Векторная молекула должна обладать несколькими обязательными свойствами. Во-первых, любой вектор должен длительное время существовать в популяции клеток-хозяев, т.е.
Реплицироваться автономно или вместе с хромосомами клеток. Во- вторых, в любом векторе должны быть биохимические или генетические маркеры, которые позволяли бы обнаруживать его присутствие в клетках. В-третьих, структура векторной молекулы должна допускать встраивание в нее чужеродной последовательности нуклеотидов без нарушения ее функциональной целостности. Для конструирования векторов в генной инженерии используют небольшие молекулы нуклеиновых кислот, способные к автономной репликации в бактериальных и эукариотических клетках - плазмиды, хромосомы вирусов, а также фрагменты хромосом эукариотических клеток.
Можно выделить 2 группы маркерных генов, позволяющие отличить трансформированные клетки: 1. Селективные гены, отвечающие за устойчивость к антибиотикам (канамицину, тетрациклину, неомицину и др.), гербицидам (у растений). Это могут быть гены ауксотрофности по какому-либо субстрату и т.д. Основной принцип работы такого маркера – способность трансформированных клеток расти на селективной питательной среде, с добавкой определенных веществ, ингибирующих рост и деление нетрансформированных, нормальных клеток. Репортерные гены, кодирующие нейтральные для клеток белки, наличие которых в тканях может быть легко тестировано.
Чаще всего в качестве репортерных используются гены β-глюкуронидазы (GUS), зеленого флюоресцентного белка (GFP), люциферазы (LUC), хлорамфениколацетилтрансферазы (CAT). К настоящему времени из этого арсенала наиболее часто используют гены GUS и GFP и, в меньшей степени, LUC и CAT. Используемый в настоящее время как репортерный ген GUS является модифицированным геном из Escherichia coli, кодирующим β-глюкуронидазу с молекулярной массой 68 кД. GUS активен в широком диапазоне условий среды с оптимумом при рН 5-8 и 37°С. Он может гидролизовать обширный спектр природных и синтетических глюкуронидов, что позволяет подбирать соответствующие субстраты для спектрофотометрического или флюориметрического определения активности фермента, а также для гистохимического окрашивания тканей in situ (например, в синий цвет). Фермент достаточно стабилен: он устойчив к нагреванию (время полужизни при 55°С составляет около 2 ч) и к действию детергентов.
Векторный Генератор Сигналов Принцип Работы
В процессе замораживания-оттаивания потери активности GUS не происходит. В составе химерных белков, созданных генно-инженерными методами, GUS обычно сохраняет свою функциональную активность. В живых клетках белок GUS также весьма стабилен и активен от нескольких часов до нескольких суток 6, c.83. Объём работы: 17 страниц Цена: 250 рублей Замечания.